Uso da técnica de Southern Blot/Hibridização associada à reação em cadeia da polimerase para aumentar a sensibilidade no diagnóstico das infecções por hemoplasmas em gatos domésticos: Use of Southern Blot/Hybridization technique associated to polymerase chain reaction to improve the sensitivity in the diagnosis of hemoplasma infections in domestic cats

O objetivo deste trabalho foi verificar se a técnica de Southern Blot/Hibridização (SB) em associação à reação de polimerização em cadeia (PCR) aumenta a sensibilidade na detecção de DNA de hemoplasmas em gatos domésticos (Felis catus). O sangue total foi coletado em tubos contendo o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra-acético, o DNA extraído a partir de 149 animais e a PCR realizada com o uso de sequências iniciadoras espécie-específicas, para amplificar subunidade 16S do RNA ribossomal de Mycoplasma haemofelis e 'Candidatus M. haemominutum' dessas amostras. Para a hibridização, foram utilizadas sondas específicas quimicamente marcadas, e os resultados visualizados por meio da adição de substrato quimiluminescente seguida de autoradiografia. Dezoito (12,1%) das 149 amostras testadas apresentaram resultado PCR-positivo para o DNA de hemoplasmas. A técnica de SB mostrou que 24/149 (16,1%) amostras apresentaram resultado positivo para hemoplasmas, confirmando os 18 resultados PCR-positivos, além de revelar seis outros adicionais (p < 0,001). O método de SB com sondas específicas mostrou-se mais sensível do que a PCR realizada isoladamente, sendo complementar para o diagnóstico das infecções causadas pelos hemoplasmas felinos.

The aim of this study was to determine whether Southern Blot/Hybridization (SB) associated to Polymerase Chain Reaction (PCR) improves the sensitivity in the detection of hemoplasma DNA in domestic cats (Felis catus). Whole blood was collected in tubes containing the anticoagulant ethylenediamine tetra-acetic acid and DNA extracted from 149 animals. PCR was performed using species specific primers to amplify the 16S ribosomal RNA subunit of Mycoplasma haemofelis and 'Candidatus M. haemominutum' from these samples. Hybridization was performed using a 16S rDNA probes chemically labeled and the results were visualized using a chemiluminescent substrate addition followed by autoradiography. Eighteen (12.1%) of the 149 tested samples had a positive PCR result for hemoplasma species DNA. SB/hybridization technique showed that 24/149 (16.1%) samples were positive for hemoplasmas, confirming the 18 PCR-positive results and reveling six additional positive animals (p < 0.001). SB/hybridization method with specific probes was more sensitive than PCR performed alone, being complimentary to this technique to diagnose infections caused by feline hemoplasmas.

Struthiolipeurus rheae Harrison, 1916 (Phthiraptera: Philopteridae) infestando avestruzes (Struthio camelus) em uma criação no Município de Três Rios, RJ / Struthiolipeurus rheae Harrison, 1916 (Phthiraptera: Philopteridae) infesting ostriches (Struthio camelus) in one farming in the Municipality of Três Rios, RJ

No Brasil, a criação de avestruzes foi iniciada no final do Século XX, para suprir o mercado internacional de carne, plumas e couro. As plumas têm importância econômica nos setores industrial e artesanal. Os piolhos podem causar prurido intenso, que, dependendo da intensidade de infestação, pode levar à depreciação das plumas. No Estado do Rio de Janeiro, são desconhecidas as espécies de piolhos que infestam avestruzes. Assim, o objetivo deste trabalho foi identificar os piolhos que ocorrem nas aves pertencentes a um criatório comercial no Município de Três Rios. Nos anos de 2003 a 2006, mensalmente, as avestruzes foram examinadas, para verificar a presença de ectoparasitos. Quando constatada a infestação, algumas plumas foram retiradas, colocadas em sacos plásticos e enviadas ao laboratório para exame. Após serem coletados das plumas, os ectoparasitos foram examinados ao microscópio estereoscópio, clarificados em hidróxido de potássio a 10%, desidratados em álcool etílico e montados em lâmina com balsamo do Canadá natural, para observação em microscópio óptico. Baseando-se na observação das características, foi possível determinar os espécimes coletados como pertencentes à espécie Struthiolipeurus rheae.

In Brazil ostriches farming began at the end of 20th Century, to supply the international market of meat, feathers and leather. Feathers are economically important to industry and artisanal sectors. Lice can cause intense pruritus that depending on the intensity of infestation can lead to depreciation of feathers. In Rio de Janeiro there are unknown species of lice infesting ostriches. Thus the objective of this study was to identify the lice that happen in birds from commercial farms in the Municipality of Três Rios. From 2003 to 2006 ostriches were monthly examined for the presence of ectoparasites. When infestations were detected some feathers were removed, placed into plastic bags and sent to the laboratory for further analysis. After removed from feathers, ectoparasites were examined using a stereoscope, followed by clarification in 10% potassium hydroxide and dehydrated in ethanol. Permanent slides were mounted in natural Canada balsam for observation in optical microscope. Based on observed characteristics, it was possible to determine that collected specimens belong to the species Struthiolipeurus rheae.

Uso da técnica de Southern Blot/Hibridização associada à reação em cadeia da polimerase para aumentar a sensibilidade no diagnóstico das infecções por hemoplasmas em gatos domésticos / Use of Southern Blot/Hybridization technique associated to polymerase chain reaction to improve the sensitivity in the diagnosis of hemoplasma infections in domestic cats

O objetivo deste trabalho foi veriicar se a técnica de Southern Blot/Hibridização (SB) em associação à reação de polimerização em cadeia (PCR) aumenta a sensibilidade na detecção de DNA de hemoplasmas em gatos domésticos (Felis catus). O sangue total foi coletado em tubos contendo o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra-acético, o DNA extraído a partir de 149 animais e a PCR realizada com o uso de sequências iniciadoras espécie-especíicas, para ampliicar subunidade 16S do RNA ribossomal de Mycoplasma haemofelis e ‘Candidatus M. haemominutum’ dessas amostras. Para a hibridização, foram utilizadas sondas especíicas quimicamente marcadas, e os resultados visualizados por meio da adição de substrato quimiluminescente seguida de autoradiograia. Dezoito (12,1%) das 149 amostras testadas apresentaram resultado PCR-positivo para o DNA de hemoplasmas. A técnica de SB mostrou que 24/149 (16,1%) amostras apresentaram resultado positivo para hemoplasmas, conirmando os 18 resultados PCR-positivos, além de revelar seis outros adicionais (p < 0,001). O método de SB com sondas especíicas mostrou-se mais sensível do que a PCR realizada isoladamente, sendo complementar para o diagnóstico das infecções causadas pelos hemoplasmas felinos.

The aim of this study was to determine whether Southern Blot/Hybridization (SB) associated to Polymerase Chain Reaction (PCR) improves the sensitivity in the detection of hemoplasma DNA in domestic cats (Felis catus). Whole blood was collected in tubes containing the anticoagulant ethylenediamine tetra-acetic acid and DNA extracted from 149 animals. PCR was performed using species speciic primers to amplify the 16S ribosomal RNA subunit of Mycoplasma haemofelis and ‘Candidatus M. haemominutum’ from these samples. Hybridization was performed using a 16S rDNA probes chemically labeled and the results were visualized using a chemiluminescent substrate addition followed by autoradiography. Eighteen (12.1%) of the 149 tested samples had a positive PCR result for hemoplasma species DNA. SB/hybridization technique showed that 24/149 (16.1%) samples were positive for hemoplasmas, conirming the 18 PCR-positive results and reveling six additional positive animals (p < 0.001). SB/hybridization method with speciic probes was more sensitive than PCR performed alone, being complimentary to this technique to diagnose infections caused by feline hemoplasmas.

[Natural infection with species of the genus Eimeria in small ruminant raised in two municipalities of the State Rio de Janeiro]. / Infecção natural por espécies do gênero Eimeria em pequenos ruminantes criados em dois municípios do Estado do Rio de Janeiro.

In order to identify Eimerian species, verify their frequencies and intensity of infection, besides the dynamics of environmental contamination by oocysts during two years, fecal samples were collected from Alpine goats and their cross-breeding and Santa Inês sheep, raised separated in Mountainous Region of the State of Rio de Janeiro. A centrifuge-flotation method was used to obtain the number of oocysts per gram of feces (OoPG). Nine species of Eimeria were identified in goats and ten in sheep. In both species of hosts, the infection intensity, was low in adults and proportionally high in kids and lambs. The frequencies varied among the species and the most frequent in sheep was E. ovinoidalis and the correlated species E. ninakohlyakimovae presented the major frequency in goats, except in kids. The natural infection was common, probably maintained by adults and also by favourable environmental conditions to dissemination and maintenance of oocysts.